动物疫病的预防精选(五篇)

序言：作为思想的载体和知识的探索者，写作是一种独特的艺术，我们为您准备了不同风格的5篇动物疫病的预防，期待它们能激发您的灵感。

篇1

【关键词】动物；疫病；预防

《中华人民共和国动物防疫法》（以下简称《动物防疫法》），第五条明确规定国家对动物疫病实行预防为主的方针，动物疫病的预防在保障畜牧业健康、持续、稳定发展过程中起到保驾护航的作用，是动物防疫工作的重中之重。随着社会主义市场经济的大力发展，畜牧业经营方式已由传统的粗方式向科学化、规模化、集约化方向转变，农区畜牧业在农业中所占的比重日益增大，已成为农民增收的一个重要突破口。贯彻落实“预防为主”的防疫方针，依法进行计划免疫是畜牧业发展的首要任务，是畜牧业增收的有效措施。

1 提高思想认识，加强领导

动物疫病包括动物传染病和寄生虫病，它严重危害养殖业和人体健康。当发生重大动物疫病时，则会造成巨大的经济损失，搓伤农民的积极性；发生人畜共患病时还会威胁人类的健康，影响社会的稳定。

各级人民政府和兽医卫生防疫部门是动物防疫工作的领导机构，具体负责组织本地区的动物疫病的预防工作。县级人民政府应当把动物防疫工作列入重要议事日程，切实履行好“双轨”目标责任制，形成动物防疫工作由政府统一领导，有关部门各负其责、各司其职、密切配合、责任到人的工作格局。把动物防疫工作作为考核领导干部政绩的主要内容之一，签订县、乡、村三级防疫目标责任书，明确防疫目标和任务，建立和完善责任追究制度，认真贯彻执行《动物防疫法》和有关的法律法规，坚持“预防为主”和“加强领导，密切配合，依靠科学，依法防治，群防群治，果断处置”的方针，强力推行计划免疫和强制性免疫，使动物防疫工作逐步走向法制化、正规化。

2 建立健全各项规章制度

2.1 生物药品的管理制度

生物药品对动物疫病的预防、诊断和治疗起着重要的作用。疫苗则是用病毒制成的生物药品，贮藏不当就会造成疫苗失去应有的效价，给动物接种后不会产生抗体，若发生重大疫情就会造成巨大的经济损失。所以，各级动物防疫机构要制定《生物药品管理制度》，县级动物防疫部门对生物药品的贮藏要做到专人、专库管理，严格按照生物药品的贮藏使用说明进行科学的管理和使用。乡级畜牧兽医站要有专用贮藏室贮藏疫苗，疫苗的发放领用要按照《生物药品管理制度》规定的要求进行登记造册，严防疫苗的浪费和流失，以及胡乱丢弃造成环境污染。村级防疫员是疫苗贮藏的最后一道环节，也是目前疫苗贮藏管理最薄弱的环节，保管的好坏直接影响到疫苗的效价，对村级防疫员应该配备疫苗专用贮藏箱，在疫苗注射过程中保证疫苗的有效接种。

2.2 防疫器械的管理制度

各级动物防疫部门要建立建全《医疗器械管理制度》，组织供应防疫器械，保证动物防疫工作的正常开展，并且贮备一定数量的器械以备应急。乡镇畜牧兽医站对村级防疫员要配备足够的注射器、针头和消毒器械，并进行不定期检查，及时更换不能正常使用的器械，保证防疫质量。

2.3 防疫登记管理制度

随着动物防疫工作的深化和工作的需要，在防疫期间，各级畜牧兽医站对各村的畜禽都要进行详细的登记，建立防疫登记簿，实行一户一卡，以村成册，做到谁防疫、谁登记、谁负责，从而有据可查，防止弄虚作假。

2.4 防疫经费的管理

各级管理部门要及时下拨防疫经费，不得以种种理由拖延、截留和挪用用于动物防疫工作的各项经费，要按照专项资金使用要求的规定做到专款专用，保障动物防疫工作能够正常开展。各乡镇人民政府要拿出切实可行的防疫费统收统筹办法，解决防疫收费门题；对收缴的防疫费要专户管理，用于开展动物疫病的预防、控制和扑灭等工作。

3 提高人员素质，严格操作规程

加强对县、乡、村三级防疫队伍素质建设，定期举办各类培训班，通过请专家授课、现场操作等形式对防疫员进行防疫知识、操作技能、职业道德等方面的轮训，切实提高防疫人员素质。在实际工作中能够严格按照操作规程的要求，做到安全接种，确保防疫质量。

篇2

关键词　疫病预防；计划免疫；加强措施

《中华人民共和国动物防疫法》（以下简称《动物防疫法》），第五条明确规定国家对动物疫病实行预防为主的方针，动物疫病的预防在保障畜牧业健康、持续、稳定发展过程中起到保驾护航的作用，是动物防疫工作的重中之重。随着社会主义市场经济的大力发展，畜牧业经营方式已由传统的粗方式向科学化、规模化、集约化方向转变，农区畜牧业在农业中所占的比重日益增大，已成为农民增收的一个重要突破口。贯彻落实“预防为主”的防疫方针，依法进行计划免疫是畜牧业发展的首要任务，是畜牧业增收的有效措施。通过对我县近几年动物防疫工作的调研，发现农区畜牧业疫病预防应该从以下几个方面加强。

1提高思想认识，加强领导

动物疫病包括动物传染病和寄生虫病，它严重危害养殖业和人体健康。当发生重大动物疫病时，则会造成巨大的经济损失，搓伤农民的积极性；发生人畜共患病时还会威胁人类的健康，影响社会的稳定。

各级人民政府和兽医卫生防疫部门是动物防疫工作的领导机构，具体负责组织本地区的动物疫病的预防工作。县级人民政府应当把动物防疫工作列入重要议事日程，切实履行好“双轨”目标责任制，形成动物防疫工作由政府统一领导，有关部门各负其责、各司其职、密切配合、责任到人的工作格局。把动物防疫工作作为考核领导干部政绩的主要内容之一，签订县、乡、村三级防疫目标责任书，明确防疫目标和任务，建立和完善责任追究制度，认真贯彻执行《动物防疫法》和有关的法律法规，坚持“预防为主”和“加强领导，密切配合，依靠科学，依法防治，群防群治，果断处置”的方针，强力推行计划免疫和强制性免疫，使动物防疫工作逐步走向法制化、正规化。

2 建立健全各项规章制度

2.1生物药品的管理制度

生物药品对动物疫病的预防、诊断和治疗起着重要的作用。疫苗则是用病毒制成的生物药品，贮藏不当就会造成疫苗失去应有的效价，给动物接种后不会产生抗体，若发生重大疫情就会造成巨大的经济损失。所以，各级动物防疫机构要制定《生物药品管理制度》，县级动物防疫部门对生物药品的贮藏要做到专人、专库管理，严格按照生物药品的贮藏使用说明进行科学的管理和使用。乡级畜牧兽医站要有专用贮藏室贮藏疫苗，疫苗的发放领用要按照《生物药品管理制度》规定的要求进行登记造册，严防疫苗的浪费和流失，以及胡乱丢弃造成环境污染。村级防疫员是疫苗贮藏的最后一道环节，也是目前疫苗贮藏管理最薄弱的环节，保管的好坏直接影响到疫苗的效价，对村级防疫员应该配备疫苗专用贮藏箱，在疫苗注射过程中保证疫苗的有效接种。

2.2防疫器械的管理制度

各级动物防疫部门要建立建全《医疗器械管理制度》，组织供应防疫器械，保证动物防疫工作的正常开展，并且贮备一定数量的器械以备应急。乡镇畜牧兽医站对村级防疫员要配备足够的注射器、针头和消毒器械，并进行不定期检查，及时更换不能正常使用的器械，保证防疫质量。

2.3防疫登记管理制度

随着动物防疫工作的深化和工作的需要，在防疫期间，各级畜牧兽医站对各村的畜禽都要进行详细的登记，建立防疫登记簿，实行一户一卡，以村成册，做到谁防疫、谁登记、谁负责，从而有据可查，防止弄虚作假。

2.4防疫经费的管理

各级管理部门要及时下拨防疫经费，不得以种种理由拖延、截留和挪用用于动物防疫工作的各项经费，要按照专项资金使用要求的规定做到专款专用，保障动物防疫工作能够正常开展。各乡镇人民政府要拿出切实可行的防疫费统收统筹办法，解决防疫收费门题；对收缴的防疫费要专户管理，用于开展动物疫病的预防、控制和扑灭等工作。

3提高人员素质，严格操作规程

加强对县、乡、村三级防疫队伍素质建设，定期举办各类培训班，通过请专家授课、现场操作等形式对防疫员进行防疫知识、操作技能、职业道德等方面的轮训，切实提高防疫人员素质。在实际工作中能够严格按照操作规程的要求，做到安全接种，确保防疫质量。

4解决好村级防疫员的报酬，稳定防疫员队伍

随着社会主义市场经济的发展和农村税费改革工作的深化（已取消农村义务工），村级动物防疫员队伍越来越不稳定。年龄大一点的老防疫员已不能胜任，而年青人又受经济利益的驱使不愿再担任，有些乡镇出现村级防疫员断层，使动物防疫工作不能正常开展。近2a来，财政对村级防疫员的报酬实行了转移支付，防疫员工资有了保障，但有些乡镇由于种种原因，不能及时足额发放防疫员工资，有些防疫员每年只能领到几十元甚至连一分钱都领不到，本身就很低的工资都不能保证，促使防疫员队伍出现滑坡。各级行政部门应该采取必要的措施，确保防疫员工资按时足额发到手，才能保证防疫员队伍的稳定发展。

5严格监督检查，防止漏洞出现

《动物防疫法》规定，各级动物防疫监督机构依法对动物防疫工作进行监督。县级动物防疫监督机构督促乡镇人民政府和业务部门组织并实施本县内的动物防疫工作，对不支持动物防疫工作的乡镇行政领导，提请县政府按相关的法律法规进行严肃处理，对不作为的业务部门进行处罚。

动物防疫工作结束后，动物防疫监督机构及时组织人员对防疫情况进行抽检，对达不到防疫密度的乡镇要求及时进行补针，对在防疫过程中投机取巧、虚报、瞒报，没有按规定要求完成防疫工作的单位和个人按照《动物防疫法》进行处罚，保证动物防疫工作不出现漏洞。

6加大《动物防疫法》的宣传力度

篇3

中图分类号：S851.33 文献标识码：B 文章编号：1007－273X（2012）01-0004－03

按照农业部提出的“两个努力确保”的总体要求，湖北省重大动物疫病防控工作力度大、亮点多、成效明显，防控工作得到了有力推进，各项措施得到了有序的落实，重大动物疫情总体稳定。虽然湖北省兽医工作亮点很多，但目前面临的重大动物疫情形势依然严峻，发生重大动物疫情的风险依然很大。

1 湖北省重大动物疫情的流行现状

1．1 禽流感疫情

2004年，全国发生有50起疫情，波及湖北省的有10起；2005年，全国发生31起疫情，湖北省有3起；2006年以来湖北省虽然没有疫情发生，但每年的流行病学调查和疫情监测显示，水禽带毒、活禽交易市场病原学阳性也时有检出，疫情发生的风险依然存在。

1．2 口蹄疫疫情

从1999年以来，湖北省O型口蹄疫疫情不断，2004年又发生了亚洲I型口蹄疫，2009年再次发生奶牛A型口蹄疫。口蹄疫血清型不断增加，而且O型新的变异株也在不断出现，控制口蹄疫的难度也非常大。

1．3 猪链球菌病

2005年四川省暴发猪链球菌病，给养猪业带来巨大经济损失和社会公共卫生严重影响。该病在湖北省也呈地方性流行，是生猪的主要细菌性疾病之一，近几年疫情呈上升趋势。

1．4 猪无名高热病（高致病性猪蓝耳病）

2006年湖北省有66个县发生了猪无名高热病，发病猪近30余万头，死亡和扑杀生猪13万头。2007年初，该病被确诊为高致病性猪蓝耳病后，湖北省仍有62个县发生疫情，发病数达到了13万头，死亡和扑杀生猪9万多头。2008年以来，随着免疫工作的强化，疫情总体基本平稳，但零星发生的态势依然存在。

1．5 人畜共患病仍比较严重

人畜共患病发生频率升高。据有关部门数据统计，近年来人畜共患传染病如结核病、布病、狂犬病等的发病率也呈上升趋势，仅湖北省每年死于狂犬病患者达300多人；同时湖北省又是血吸虫病的重疫省，虽然通过部省联动，增加投入，防治工作取得了显著效果，但要根除血吸虫病仍然任重道远。此外，新发的动物传染病和人畜共患病不断出现，不仅严重影响了畜牧业生产的发展，而且对人民健康和公共卫生安全也构成了严重威胁。

2 湖北省重大动物疫情面临的形势依然严峻

从禽流感来看，近几年虽然未接到正式疫情报告，但据湖北省动物疫病预防控制中心检测，其阳性率大概是1％。实际上，如果只算家禽交易市场的活禽，阳性率还要大于1％。当前检测出的阳性全部来源于家禽交易市场。这说明发生疫病的病原不仅存在，而且病原在不断变异，再加上饲养条件差，防疫意识差，如果工作上出现一些漏洞，发生疫病的风险则很大。

从口蹄疫来看，湖北省以前口蹄疫O型、亚洲I型、A型都同时存在。据湖北省动物疫病预防控制中心监测，口蹄疫野毒抗体阳性依然存在。这说明污染面仍然不小。加之其病毒型多变异快，防控形势也不容乐观。

从高致病性猪蓝耳病来看，也有三大风险：一是病源的污染面大。湖北省在2006年、2007年曾经有过大的暴发，2008～2009年也有局部发生。2011年据湖北省动物疫病预防控制中心检测，病原学的阳性率为7％，实际数据或许要高一些；二是目前湖北省散养户还占有相当大的比例，而散养户饲养条件差，环境卫生差，防疫意识也比较差，存在着发生重大疫情的风险；三是湖北省气候条件比较特殊，高温高热高湿天气时间较长，容易诱发高致病性猪蓝耳病。因此，发生高致病性猪蓝耳病的风险极大。

综上所述，通过实施强制免疫后，湖北省重大动物疫病的发病数和死亡数大幅下降，疫情呈零星散发状态。这表明疫情流行得到控制，但疫情散发的态势依然存在。重大动物疫病病原种类多、变异快、污染面广，疫情随时可能出现反复。此外，我国周边国家疫情也十分复杂，外疫传入的风险也在加大。近几年，周边国家亚洲l型和A型口蹄疫、高致病性禽流感、非洲猪瘟等疫情频繁发生，新病种、新亚型传入的可能性增加，非洲猪瘟等境外重大动物疫情威胁仍持续存在，因此，防控形势依然严峻。

3 湖北省重大动物疫病防控存在的主要问题

3．1 兽医管理体制不健全

湖北省动物防疫和畜产品安全监管职责分散在多个部门，动物检疫管理体制没有完全理顺，部门间监管权责分离。管理机构设置不合理，职责不清，管辖关系十分复杂。现行管理体制与国际通行做法不一致，不符合“独立兽医管理体制”的要求。

3．2 资金投入不足

国家和各级地方政府近年来的投入远不能满足防控工作的需要。湖北省每年要对饲养的几千万头牲畜和上亿只（羽）家禽进行多次免疫，需要直接支付的人工、交通、器械、药品的损耗、疫苗运输、存贮等费用是巨大的。平时用于畜禽养殖场的消毒、疫情监测、发生疫情时对染病畜禽和同群畜禽进行扑杀的补贴没有足够的经费保证。特别是奶牛、肉牛、生猪的扑杀补贴明显低于市场价值，养殖户反映强烈。

3．3 地方保护

湖北省的兽医管理是以行政区划作为管理单位，这种管理特点与控制动物疫病的科学规律不相适应，也容易使各项工作受到地方保护主义的干扰。

3．4 技术支撑力度不够

从为动物防疫提供有效的技术支持角度分析，我们目前尚未形成完善的技术支持体系。在动物疫病监测、诊断、流行病学调查研究等领域急需加大研究和建设力度。

4 重大动物疫病防控策略思考

当前，湖北省畜牧业正处于一个转型时期，正处在由传统的分散养殖向规模生产转变，由家庭副业向农民增收的支柱产业转变。防疫工作必须适应这种形势的转变，进一步转变防疫工作理念，转变防疫工作方式，具体讲就是按照《动物防疫法》的规定，切实加强动物防疫管理，预防控制动物疫病，促进养殖业发展，保护人民健康，维护社会公共卫生安全。

4．1 切实转变防疫观念

要适应畜牧业发展的新形势，转变防疫发展方式，笔者认为还是要认真贯彻落实《动物防疫法》。坚持国务院提出来的“24字”防疫方针，以稳定控制重大动物疫情为目标，以创新重大动物疫病防治工作体制机制为动力，以提高防控技术支撑能力为依托，以落实投入、健全公共财政机制为保障，以强化队伍建设、稳定基层防控体系为重点，组织开展好动物重大疫病防控工作。

一是动物防疫要准确定位。将动物防疫定位于保护人类健康与安全，并以此为准则，确立动物防疫工作的地位、目标、方针及措施，实现动物防疫工作由以保护动物健康为核心向以保护人类健康与安全为核心的转变，推进畜牧业全面、协调、可持续发展。

二是动物防疫要全程监控。建立完善动物产品生产全过程的动物防疫监管机制，对动物的饲养、管理、屠宰、销售等各个环节实行全程监控。

三是动物防疫要依法管理。形成依法治牧、依法防疫的工作格局，动物防疫是政府行为，政府保密度、部门保质量，确保防疫工作落到实处。

四是动物防疫要树立长年防疫的理念，由春秋集中免疫转变为常年免疫。目前对散养户的月月补针工作要作为一项重要的工作来抓（规模以上养殖场可以按照防疫程序进行免疫）。

4．2 建立和完善兽医管理体制

在兽医管理体制方面应吸取国外先进经验，建立垂直管理的官方兽医体制。目前省、市、县都设有畜牧兽医局、动物卫生监督所、动物疫病预防控制中心，兽医三大职能机构基本建立（行政管理、行政监督执法、事业技术支撑），但兽医相关职能要相对集中，才能做到责、权、利统一。

兽医职责就是减少动物疾患，保障动物及动物产品质量安全。要深化完善乡镇畜牧兽医体制改革，依据动物防疫法和国务院、省政府的文件要求，建立健全乡镇动物疫病防控公共服务机构，最好是重新恢复乡镇畜牧兽医站，配备动物防疫管理人员（夷陵模式），加强村级防疫员队伍建设，加强乡镇畜牧兽医站动物防疫基础设施和村级防疫网络建设，提升基层兽医领域的工作能力，使乡镇这一级能按照规定职责组织做好本辖区的动物疫病防控工作。

4．3 将动物疫病防控以疫苗免疫为主向综合防控的策略转变

动物疫病防控不能过分依赖疫苗甚至滥用疫苗，任何时候都应把生物安全放在首位。另外，在实施疫苗免疫的过程中，还可能发生免疫失败，因此，以消灭传染源和切断传播途径为目的生物安全措施才是第一道防线。疫苗免疫只能作为动物疫病防控的一种措施，不能完全依靠疫苗免疫来控制动物疾病。

4．4 转变饲养方式，大力推广标准化养殖

一是制定促进畜牧养殖业健康发展的新制度。大力发展现代畜牧业，必须加快推进畜牧业“专业化、市场化、区域化、标准化、产业化”建设，以养殖小区和规模场（户）建设为重点，提高畜牧业生产的组织化程度。通过养殖小区建设，明确动物防疫条件合格许可制度，彻底实现人畜混养向人畜分离、场村分离的转变。实行统一防疫、封闭管理、严格消毒、定期监测、严格检疫，增强抵御重大动物疫病风险的能力，才能提高动物疫病防控水平。

二是创新动物标识及疫病可追溯管理机制。依据试点工作经验，对防疫重点部位实行定人监管，积极稳妥地推进体系建设的各项工作，组织制（修）订相关管理制度和技术规范。加大牲畜耳标和移动智能识读器的抽检和监督检查力度。探索通过科学有效的途径，强化管理措施，保证养殖、监管等基础信息全面、真实、有效、及时地传入数据库，实现动物标识及疫病可追溯管理目标。

4．5 建立和完善重大动物疫病防控机制

一是要建立和完善重大动物疫病应急处理机制，坚持“加强领导、密切配合、依靠科学、依法防治、群防群控、果断处置”的防控方针，同时还要坚持“统一领导、分级负责、反应及时、综合防控、措施果断、合力扑疫”的处疫措施，做到早发现、早响应（处置）、应急处理、迅速扑灭疫情。这就要求各级政府及相关部门及时建立重大动物疫病应急处理预案，建立应急指挥系统，确定相关部门职责，建立防控重大动物疫病工作责任追究制度，组建应急队伍，做好重大动物疫病的防控工作。

二是要建立和完善重大动物疫病的预防机制，对重大动物疫病实行预防为主的方针，依法对重大动物疫病实行计划强制性免疫制度，实施免疫、加强检疫监督、常规性消毒、加强饲养管理、阻断传播途径等都是预防为主方针所包含的内容。

三是要建立和完善重大动物疫病的预警机制，建立健全省、市、县、乡、村五级监测网络体系，省、市、县三级动物疫病预防控制中心（CDC）负责疫情监测情况的调度和监测网络的管理。建立和完善重大动物疫病的管理机制。根据重大动物疫病疫情传播速度、流行范围和趋势，建立疫情的信息收集和专家分析制度，将疫情划分等级进行预警预报，根据疫情发生的等级进行分级管理。

四是要建立和完善重大动物疫病防控保障机制，省、市、县各级都要建立动物防疫物资常年储备制度，储备相应足量的应急物资，重点储备疫苗、治疗药品、消毒药品、消毒设施、防护用品、诊断试剂、封锁设施、无害化处理设施设备等防疫物资。各级财政应安排好重大动物疫病储备资金，以备应对突发疫情，同时加强技术储备。

五是要建立群防群控、联防联控机制，要充分发挥我们现行体制的政治优势和组织优势，动员基层组织自觉参与动物防疫工作，发动群众，依靠群众，坚持专业队伍和群众防治相结合。加强动物防疫知识的宣传普及，加强对广大养殖者的培训，把科学防治的技术交给群众，增强群众的自我保护意识和防疫能力。

六是要加强防控技术研究，提升动物医学原创和集成创新能力。科研院校与技术推广部门要各司其责。科研院校是重大动物疫病基础研究的重点，应开展病原生态学、分子流行病学、免疫与发病分子机理、病原体基因组学和蛋白质组学等方面研究，摸清湖北省重大动物疫病的基本资料，建立完整的疫病流行病学数据库和流行趋势计算机模拟预测模型，为防疫提供科学依据。推广部门是应用研究的重点，应加强重大动物疫病新型疫苗与鉴别诊断和快速诊断试剂、疫病预警预报、疫病净化集成与示范等技术研究，建立相应的技术平台，形成重大动物疫病科学研究、技术集成、产品开发、防控措施于一体的系统工程。在基础研究和应用研究中要重视人畜共患传染病和进出口重大动物传染病的防控研究，尤其是重大外来动物疫病发生机理与监控的基础与应用研究等，同时，要尽快完善新技术并迅速加以推广应用，全面提高我国动物疫病防控能力与水平，确保我国养殖业的健康发展和人民生命财产安全。

七是要继续加大投入，提高重大动物疫病综合防控能力。一是要转变经费投入方向，逐步将国家拨疫苗采购经费以及动物防疫经费向拨疫情扑杀补贴经费及防疫经费模式转变，积极争取建立重大动物疫病防疫及扑杀经费逐年增长的投入机制。二是要解决防疫经费不足问题，以确保强制免疫所需的人工、交通、器械、药品购置费及疫苗调运、储存费能正常支出。三是要尽快提高各类动物现行的扑杀补贴标准。各类标准依法由农业部门与财政部门共同制定，依据市场行情动态管理，决不能一个标准管几十年。四是要增强对防控重大人畜共患病的投入。要重点增加防控布病、结核病、狂犬病及血吸虫病的投入，逐步将这几种直接危害人民群众身体健康和生命安全的人畜共患病列入重大动物疫病防控工作的范围。五是要积极争取对生物安全隔离区和无规定动物疫病区建设的投入。各地要以创建生物安全隔离区和无规定动物疫病区为抓手，积极争取财政的投入，工作上实行免疫与净化相结合的防控策略。对人畜共患病实施群防群控，要秉承“共一世界、同一健康”的理念，不同部门不同区城要联合起来，彻底扑灭传染源，切断疫病传染途径，阻断疫病在人与动物之间的循环传播。加强免疫效果监测和病原学监测，逐渐减少免疫带毒动物，在条件成熟的地区或区域，要分区城、分阶段地逐步建立生物安全隔离区和无规定动物疫病区，最终实现单一病种的净化和扑灭。

收稿日期：2011-12-05

篇4

【摘要】 目的 利用诱导的离体动物细胞系兔肾细胞RK13 和昆虫细胞Tn5B1产生抗菌活性肽类物质，筛选具有抑菌作用的抗菌药物。方法 利用热灭活的大肠杆菌DH5α或柠檬色葡萄球菌分别诱导RK13和Tn5B1，对16 h后的细胞诱导产物应用滤纸片法和双层平板法做抑菌活性检测。结果 诱导的细胞系随着诱导时间延长出现了一系列形态变化。诱导产物均对受测细菌金黄色葡萄球菌形成了较明显的抑菌圈，且热灭活的大肠杆菌DH5α诱导RK13的诱导产物较之后者的抑菌圈更明显。结论 RK13和Tn5B1经热灭活的大肠杆菌和柠檬色葡萄球菌分别诱导后分泌了具有抗菌活性的物质。

【关键词】 离体细胞 诱导 抗菌肽 免疫防御

【Abstract】 Objective Cultured RK13 and Tn5B1 animal cell lines were induced with heatkilled Esherichia coli DH5α or Staphylococcus sarophyticus.Methods Analysis by bacterial growth inhibition experiments and twolayer plate method indicated that they generated obvious inhibition zones compare to control.Results Morphological change was displayed on cell lines induced.Staphylococcus aureas to be detected were susceptible to the antimicrobial substance from inducible animal cells in culture.In comparison， the antimicrobial substance induced with heatkilled Esherichia coli DH5α displayed more obvious inhibition zones.Conclusion Antibacterial substances were produced and secreted into media from induced animal cell lines.

【 Key words】 cell lines， induction， antimicrobial peptide， immune defense

研究发现，从低等的细菌、线虫、水生生物、昆虫、蛙到哺乳动物以及人类细胞都能产生抗菌肽［1，2］。抗菌肽作为阳离子型小分子多肽，具有广谱抗菌活性，在机体的天然免疫中起着关键的调节作用［3］，并且作为辅助因子，与其他的免疫效应物一起可加快伤口愈合、消除炎症、控制感染［4］。

细菌的耐药性出现在20世纪50年代，这给临床药物治疗带来了困难。许多研究致力于发现新的抗菌药物。抗菌肽是生命体天然免疫系统中的小分子多肽，是免疫防御中的重要物质，具有抗细菌、真菌、寄生虫、病毒，杀害肿瘤细胞的功能，是新型抗菌药物的理想选择［5］。从水生动物体内分离到杀锥虫以及利什曼原虫的抗菌活性肽，蛙皮肤上分离到抗幽门螺杆菌的抗菌肽、橘柑树上抗青霉菌的富含色氨酸的活性肽等［2，6］。研究表明，抗菌活性物质不仅可以从生物机体中获得，也已经从多种离体细胞诱导分离得到［7］。我们实验室利用灭活的大肠杆菌以及柠檬色葡萄球菌诱导离体哺乳动物细胞及昆虫细胞产生了抗菌活性物质——抗菌肽。

1 材料与方法

1．1 材料 供试细胞系及菌株：粉纹夜蛾Tn5B1细胞由武汉大学提供，兔肾动物细胞RK13由华中师范大学提供；大肠杆菌DH5α、柠檬色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌均系本实验室保存菌株。

1．2 方法

1.1 哺乳动物细胞及昆虫细胞培养

1.1.1 兔肾细胞RK13培养：兔肾细胞系RK13利用辅加10%小牛血清的1640培养基于37℃、5%CO2的培养箱中传代培养，每天观察细胞贴壁生长情况，每两天换液并传代，扩大培养以备诱导所用。

1.1.2 Tn5B1细胞的培养：在液氮冻存的Tn5B1细胞按常规方法复苏，复苏后的细胞用辅加20%胎牛血清的Grace培养基培养，细胞生长状态恢复正常后换用补加10%胎牛血清的Grace培养基常规培养，以备诱导。

1.2 细菌的培养

1.2.1 大肠杆菌培养与制备：将DH5α接种于LB培养基中，37 ℃、150 r/min恒温摇床培养过夜，离心取沉淀，121 ℃、20 min灭活备用。

1.2.2 柠檬色葡萄球菌收集与制备：将活化的柠檬色葡萄球菌划线接种于普通琼脂平板上，37℃恒温箱中培养，收集细菌，80 ℃、30 min灭活备用。

1.3 抗菌肽的诱导

1.3.1 兔肾动物细胞抗菌活性物质的诱导：将灭活的大肠杆菌和柠檬色葡萄球菌分别与1640培养基混合（按照过量诱导菌比例），加入PBS漂洗过的兔肾动物细胞RK13的培养瓶中诱导16 h后收集，2000 r/min、10 min离心弃去细菌和细胞等取上清。对此上清进行三氯乙酸冰浴沉淀10 min后8000 r/min、10 min离心取沉淀，丙酮洗后14 000 r/min、15 min离心两次，分离出的沉淀物质为待检测的抗菌物质，于-20℃冰箱保存备用，对照组不加细菌，对细胞作同样处理。

1.3.2 昆虫细胞抗菌肽的诱导：传代培养的Tn5B1细胞经PBS洗两次后如上述处理，不同在于用Grace基础培养基培养16 h后收集上清，离心后进行有机溶剂沉淀收集备用［14］。

1.4 抗菌活性的检测

1.4.1 滤纸片法：取抗菌活性物质分别对大肠杆菌DH5α、柠檬色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌进行抑菌活性检测，接种10 μl活化菌株后涂布平板，然后将加有样品的圆滤纸片轻放于平皿上，37 ℃恒温培养箱过夜，并用灭活的对应细菌作对照试验。

1.4.2 双层平板法：将活化的葡萄球菌加入冷却至70℃的半固体培养基中混匀，迅速倾入已倒好的平板上，待半固体培养基形成后，将加有不同浓度样品的圆滤纸片轻放其上，37 ℃恒温培养箱过夜，灭活的对应细菌作对照试验。

2 结果

2.1 诱导前后细胞生长状况观察 诱导前：细胞生长状态较好，镜下细胞饱满、透亮，呈梭形或圆形，细胞间隙较小，贴壁生长（如图1）。诱导后：诱导后细胞生长较慢，但是12 h后细胞生长较快，细胞间隙变小，镜下细胞生长状态正常（如图2）；但是随着诱导时间延长，镜下细胞变得小不再饱满，且细胞间隙增大，多见细胞聚集成团，培养液中有细胞漂浮（如图3）。

2.2 抗菌活性 抑菌试验显示，诱导的兔肾细胞系RK13经过热灭活的不同病原菌诱导，产生了抗菌活性物质，其中大肠杆菌诱导RK13以及柠檬色葡萄球菌诱导RK13产生的抗菌物质对金黄色葡萄球菌都有抑菌活性，相比之下前者抑菌作用更强，而诱导的抗菌产物对金黄色葡萄球菌作用效果强于柠檬色葡萄球菌。而同时进行的氨苄青霉素对金黄色葡萄球菌的药敏试验没有出现抑菌圈。图4示热灭活大肠杆菌诱导兔肾细胞所得诱导物质进行抑菌试验的结果，可清楚的显示，培养的兔肾细胞RK13，经过DH5α诱导后上清产生了抗金黄色葡萄球菌的活性物质。表1 两种灭活菌分别诱导兔肾细胞RK13后对不同菌株的抑菌情况菌

3 讨论

对培养的正常动物细胞及诱导的动物细胞进行形态学观察，发现RK13经诱导后细胞变圆，生长缓慢，细胞暂时出现生长迟缓期，此时细胞被诱导源所攻击，细胞正逐步适应有病原菌的生长环境，但是随着诱导时间的延长，12 h后诱导的细胞生长较快，与正常培养条件下同样生长的细胞比较，且生长状况较好，这时的细胞为了生存，本身受刺激产生了抗菌活性物质，说明诱导后的细胞产生了抗菌物质，在诱导12 h、16 h细胞瓶底贴满呈规则梭形的细胞，细胞已经产生了足够量的对付外界病原菌的抗菌物质，随着产生的抗菌物质增多，细胞开始适应有病原菌的环境，生长状态逐渐正常化。随着诱导时间的继续延长，细胞之间出现接触抑制，24 h细胞出现结团，最后漂浮死亡。

我们利用诱导的兔肾细胞系RK13细胞，收集上清浓缩蛋白，获得了较高含量的抗菌蛋白肽类物质。对于Tn5B1昆虫细胞诱导前后的细胞生长也发生了类似的变化过程，由于目前对昆虫抗菌肽的研究较多，关于粉蚊夜蛾离体细胞诱导抗菌肽的试验，洪华珠等［8］的研究中，也有了很好的说明，在此我们将其用于对比试验。此RK13细胞诱导产生的抗菌物质与诱导Tn5B1细胞产生的抗菌肽是否不同，有待进行对比研究。我们还试图寻找此类抗菌肽与抗生素的异同，抑菌试验显示，诱导RK13细胞获得的抗菌肽能够抑制金黄色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌的生长，而受测的金黄色葡萄球菌对氨苄青霉素不敏感。近半个世纪以来，随着抗生素的大量使用，很多病原菌对抗生素产生了耐药性，特别是金黄色葡萄球菌，对多种抗生素都有较强的耐药性，初步试验显示，诱导兔肾细胞RK13产生的抗菌物质对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，这对人类解决临床上许多由金黄色葡萄球菌引起的疾病有重大意义，为人类寻找新的抗生素替代品提供了可能。但是，把这种抗菌肽作为药物应用于临床还有很多问题需要解决，还需要进一步的试验研究。

参考文献

［1］ 　Chen L， Li Y， Li J，et al.An antimicrobial peptide with antimicrobial activity against Helicobacter pylori［J］.Peptides，2007，28(8):15271531. ［2］　Bradshaw J.Cationic antimicrobial peptides : issues for potential clinical use［J］.BioDrugs，2003，17(4):233240.

［3］　Boman HG.Comment in: Antibacterial peptides: basic facts and emerging concepts［J］.J Intern Med，2004，255(4):519520.

［4］ Brown KL， Hancock RE. Cationic host defense antimicrobial peptides［J］. Curr Opin Immunol，2006，18(1):2430.

［5］　Rossi LM， Rangasamy P， Zhang J，et al.Research advances in the development of peptide antibiotics［J］.J Pharm Sci，2008，97(3):10601070.

［6］ Munoz A， LópezGarcía B， Marcos JF. Comparative Study of Antimicrobial Peptides to Control Citrus Postharvest Decay Caused by Penicillium digitatum［J］.J Agric Food Chem，2007，55(20):81708176.

篇5

市卫生局：

今年第七号热带风暴“天鹅”给我市农业和畜牧业造成巨大损失。风暴过后，由于农作物叶片受损严重，容易发生各种病虫害；畜禽淹死及体弱，也容易引起动物疫病的发生，特别是人畜共患病的发生。为了做好灾后动植物疫病的防治工作，恳请贵局拨给药品、疫苗、器械购置经费15.006万元，其中动物疫病防治经费8万元，农作物病虫害防治经费7.006万元。

附：灾后动物疫病防治经费测算