养生保健服务精选(五篇)

序言：作为思想的载体和知识的探索者，写作是一种独特的艺术，我们为您准备了不同风格的5篇养生保健服务，期待它们能激发您的灵感。

篇1

关键词:中医养生保健;服务贸易;商业存在;贸易壁垒

与传统中医的诊疗服务不同，中医养生保健服务更具有“简、便、验、廉”的特点和优势，容易为东道国成员所接受，因此，发展中医养生保健服务贸易，是中医药服务贸易快速发展的主要途径之一。但是，中医养生保健服务贸易在市场准入方面遭遇了诸多贸易壁垒。

一、中医养生保健服务贸易市场准入概述

（一）中医养生保健服务贸易模式

中医养生保健服务贸易的提供模式主要有四种：跨境交付、境外消费、商业存在和自然人流动。在中医养生保健服务贸易中，其服务提供模式往往不是单一的。在全球化和信息时代，商业存在日益成为中医药养生保健服务贸易的主力军，成为中医养生保健服务在海外得以长久存在的主要战略支撑。

（二）市场准入面临的非关税壁垒

中医养生保健服务贸易市场准入，是指一国允许中医养生保健服务进入本国的条件、门槛和制度。由于服务贸易的无形性，一国为保护本国的服务市场，通常会采取一些非关税壁垒措施，消除或降低对本国的影响，主要表现为对中医养生保健服务贸易市场准入的限制。

（三）中医养生保健服务贸易发展现状

随着生活水平提高，民众对养生保健开始越来越关注，再加上国际上“回归自然”浪潮的兴起，中医养生保健在世界范围内正备受瞩目。现阶段，中医养生保健服务贸易在商业存在模式下有以下特点：1．服务机构数量有限：中医养生保健服务机构是传播中医保健服务的有生力量，但是目前中医养生保健机构数量有限，能够走出国门的中国养生保健服务机构更少。规模相对较大，如瑞士莲福中医药集团，在瑞士和美国开设了21家连锁医疗中心，开展针灸，推拿服务，并创建“联中药厂”为其所属诊所提供重要保健品和养生药茶。这样的机构并不多见。2．从业人员输出规模小：近年来,世界中医学联合会和瑞士中医集团、洛桑中医诊所、欧洲中医基金会以及阿曼苏丹国开展中医医疗、保健、教育等开展国际人才交流与合作，建立了一些长期合作关系的中医人才派出渠道。总体上，中医养生保健服务从业人员输出规模较小。

二、中医养生保健服务贸易市场准入壁垒问题

服务贸易的无形性和不可储存性决定了其壁垒表现形式只能是非关税壁垒，一方面是对中医养生保健服务机构在市场准入方面的限制，另一方面是对从业人员资质及其跨国执业方面的法律规制。

（一）市场准入壁垒

以澳大利亚为例，目前澳大利亚有5000多家诊所，其中中医诊所比较少。中医保健、针灸等是西医从业人员的辅助治疗方式，目前有3000个西医诊所内设立针灸治疗项目。澳洲政府近年来通过语言、专业对中医、针灸师开始启动注册，限制了相关保健医师从业资格，影响了一些中医诊所的正常营业。

（二）从业人员市场准入壁垒

1．澳大利亚对中医养生从业人员市场准入限制：作为“补充医学”的中医养生保健服务，近年来在澳大利亚受到了一定限制。据统计，澳大利亚约有4500名针灸、中医师，虽然中医针灸服务在澳洲已经被广泛认可，但是自2012年7月1日开始，澳洲通过对境内的中医、针灸师颁发许可证来限制医师的行医范围和对象，这使得近90%中医难以在澳洲独立行医。澳洲医学会对上千名会员统计，目前通过注册者仅为13%，有条件注册者为87%，其中限制注册者为25%。对中医、针灸师的法律限制将阻碍中医养生保健从业人员在当地医院、诊所的执业。2．美国对中医养生从业人员的市场准入限制：中医养生保健服务在美国是补充和替代医学（以下简称CAM）。近年来，美国接受CAM治疗人数正逐年增加。据调查1997-2002年5年间，CAM疗法呈稳步增长趋势，最长用的有肌肉松解疗法（14.2%）和按摩疗法（7.4%）。随着中医保健在美国市场的不断升温，美国各州开始针对中医保健医师的从业资格进行一定考核。目前美国50个州中有44个州对针灸师通过按期完成继续教育学分的方式颁发针灸执照。美国成立的东方医学资格认定委员会，对相关中医保健从业人员资格进行认定管理。这些管理活动对中医养生保健从业人员构成了间接限制。

三、中医养生保健服务贸易市场准入壁垒在GATS框架下的分析

在GATS框架下，服务贸易的两道关卡是市场准入和国民待遇。两者联系紧密，市场准入是适用国民待遇的前提，国民待遇又是市场准入的保证。中医养生保健服务贸易的市场准入，主要是“开业权”和服务提供者资格的问题。

（一）市场准入

在商业存在服务模式下，中医养生保健服务贸易壁垒主要表现为限制服务机构设置和限制服务提供者资格及流动等。前者主要表现为设置较高的门槛或限制开业权等。这种壁垒涉及到养生保健服务提供商在本国的存在及允许参与的程度；中医养生保健外籍雇员市场准入方面的壁垒主要为对从业人员入境手续和就业许可方面的限制等。为了减少贸易壁垒推进服务贸易自由化，GATS限制成员方在服务贸易中设置市场准入方面设立壁垒。市场准入在GATS并非一般性义务，而是根据承诺表承担特定的义务。具体到健康保健服务领域，一成员方在市场准入方面所做的承诺，涉及到该成员方是否允许其他成员的健康保健服务和服务提供者进入本国服务市场及进入程度问题。合法管理与市场准入壁垒有时候难以区分，构成市场准入的主要障碍。非关税壁垒通常规定在各国对国际服务贸易的管理性法规之中，并且经常以合法管理的名义出现。以澳大利亚为例，对中医保健服务人员进行从业资格管理，影响到了从业人员的正常执业。看似合法的管理措施，使得近90%中医难以在澳洲独立行医。如此大比例中医保健从业人员的失业，也很难说不是澳洲对中医养生保健服务从业人员设置的贸易壁垒。

（二）国民待遇

与市场准入相同，国民待遇也不属于GATS成员国的普遍义务，而是特定义务。各成员国须在自己承诺开放的健康保健服务部门中给予外国保健服务和保健服务提供者以国民待遇。国民待遇方面的壁垒主要体现为服务主体进入一国市场后采取的限制措施。在中医养生保健服务领域，表现为对保健服务从业人员的歧视性措施。例如，征收更高的税费，以及对外籍保健从业人员要求更高级别的专业证书等。

四、减少中医养生保健服务贸易市场准入壁垒的对策

（一）加强国际谈判减少壁垒

推动中医养生保健服务贸易，减少贸易壁垒是关键。具体来说，一方面可以在GATS框架下，扩大各国具体承诺义务来限制健康保健领域壁垒，另一方面也可以寻求国际法方面的保护，通过国际条约保护中医养生保健服务贸易。1．通过谈判扩大成员方具体承诺：按照GATS的规定，一个成员对市场进入的具体承诺，均需经过谈判，逐项列入“具体承诺表”中。具体承诺是成员方按不同的服务提供方式，就市场准入和国民待遇及其他影响服务贸易的措施，在服务部门或分部门的适用范围和条件所做的承诺。例如，中医养生保健服务主体资格的认定方面，鉴于实践操作中承认服务提供者资格的复杂性，如涉及保健机构从业许可证、营业执照以及从业人员资格、证书等问题，GATS规定可通过双边或多边协议解决或成员自行单方面宣布完成。因此，在GATS框架下，加强成员各方之间的双边或者多边谈判，有助于确立中医养生保健服务主体资格的统一标准，扩大各成员方在中医养生保健主体市场准入方面的承诺义务。2．通过谈判加强国际立法：中医养生健服务贸易的快速发展，需要在国际法律层面予以支持和保护，可以通过签署多边国际条约、诸边国际条约或双边国际条约实现。中国作为经济和政治大国，与世界上主要国家和地区存在着密切的贸易和投资关系，签订了大量的双边、诸边贸易和投资条约。我国各主要相关部门有必要在国际重要谈判和条约中，有意识地通过条件互换或其他形式，为中医养生保健服务进入其他国家开辟合法通道。

（二）积极推进中医养生保健国际服务标准建设

发展中医养生保健服务贸易，减少各国在市场准入方面的壁垒，需要有一个国际通行的服务标准。“明确、统一、确定、可验证”的服务标准，成为开展中医养生保健服务贸易的核心问题之一。在我国国内“国家标准、行业标准和企业标准”三级标准体系下，中医养生保健服务贸易企业应团结一致，推动有关国际标准的出台。此外，国际标准化组织（ISO）在世界范围内有着广泛的影响，中国中医养生保健管理部门和行业组织应当积极参与中医养生保健国际标准体系的制定，为中医养生保健服务标准建立国际标准，消除分歧。“一带一路”为中医养生保健服务的国际谈判和标准制定带来了契机。在中国与澳大利亚、匈牙利等国的双边谈判中，签订了新的中医药合作协议；通过各国谈判协商，国际标准化组织《一次性使用无菌针灸针》的国际标准。中医养生保健国家管理机构及相关部门应积极参与到各国及区域间的双边及诸边谈判中去，为确立中医养生保健服务标准努力。

综上所述，在商业存在模式下，解决中医养生保健服务贸易的市场准入法律问题，需要中医药界和法律界、政府和民间、外交和经济部门等多方的共同努力。

作者:杨逢柱 王 芳 单位:北京中医药大学人文学院 北京航空航天大学法学院

参考文献：

[1]喻文迪．中医药国际服务贸易现状及发展趋势探析．世界中医药．2009（2）．

[2]黄建银．中医药服务贸易发展战略选择的探讨——经济全球化背景下的中医药国际服务需求曲线模型．中医药管理杂志．2007，15（12）．

[3]司富春、宋雪杰、高燕．我国中医养生保健发展的现状及思考．中医研究．2013，26（7）．

[4]刘薇．WTO对法律服务贸易的规制及中国应对．中国政法大学硕士论文．2010．

[5]木泉．中国国际旅游服务贸易法律问题研究．中国政法大学硕士学位论文．2011．

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×做好妇女儿童保健工作

×我们（）镇地处北票城郊，现有个行政村，总人口万，有周岁育龄妇女人，其中已婚育龄妇女人，采取措施的人，节育措施落实率；年月份新出生婴儿人，其中：男孩人，女孩人，人口出生率、自然增长率分别为千分之和，计划生育率达，婴儿出生性别比为：，低于规定指标，我们的主要做法有以下几个方面：

×一、注重“三优”知识的普及与推广

×镇党委、政府高度重视“三优”知识的普及。组建了优生、优育指导分会参与部门为卫生办、计生办。并把这项工作纳入建设新型生育文化的组成部分。

×为把“三优”知识的普及做为计生工作开展优质服务的一项主要活动内容，常抓不懈，采取重点培训与分类指导相结合，集中组织与分散培训相结合，电化教育与发放明白纸、热线咨询相结合的做法，效果较为显著，近三年来共培训业务骨干人次，与卫生办和镇医院联合印制下发图文并茂的“三优”知识宣传折页万份，自制“三优”知识宣传品、宣传单万张，并为各村统一配制“三优”知识光盘套，基本上形成了“三优”知识电教化和“三优”知识的普及。版权所有

×二、强化二胎生育指标审批的监督

×为做好这项政策性强的工作，我们采取了事前公示制，并把这项工作做为计生村务公开的主要内容，每年的第一季度，各村把应批标对象全部公开上墙，接受群众监督，自年至今全镇共审批二胎生育指标例，无一例错批。其中：五间房村审批二胎生育指标人。

×三、深入开展综合治理出生人口性别比工作

×为切实把治理出生人口性别比偏高这件事做好、做细，做出成效，镇政府与辖区内医疗单位、民办诊所、执业机构全部签订了合同书，共签订合同书份，印制宣传单份，并在第五人民医院开展了治理性别比百日会战宣传日活动，设法律咨询，生殖保健，优生优育咨询台个，发放宣传单多份，为过往群众释疑答问咨询服务人次，受到群众的好评，由此拉开了治理性别比偏高的序幕，年月份全镇新出生人口性别比为：，使我镇出生人口性别比趋于正常。

×四、强化生殖保健服务

×针对广大育龄群众的愿望和需求，我们始终把为育龄群众提供人温馨和谐的服务做为计生工作的切入点，尽最大努力，克服困难来满足育龄群众的要求，一是抢抓时机。今年春季利用农闲我们邀请市技术服务站技术人员来我镇做生殖健康检查；二是舍得投入。在镇村财力紧张的情况下，为育龄群众生殖健康检查提供免费服务，仅此直接支付元。三是效果显著。在全镇名已婚育龄妇女当中有人接受了生殖健康免费检查，普查率为，查出各种妇科疾病人数为人。（其中五间房村普查率）深受群众的欢迎。

×五、计生优质服务围绕妇女儿童保健开展工作。

×在我镇计生优质服务工作中，积极配合各级妇联组织，为妇女儿童提供快捷、方便、实质的服务。具体表现为一是为每年出生左右的孕产妇提供“三优”服务和缺陷儿干预工程的服务，在近三年出生近千人中，病残儿出生仅有例，与过去相比有较大幅度下降；二是在生殖健康服务中采取了跟踪服务，分类管理，配合治疗的做法，对患病人员建立档案，指导患病妇女选择最佳治疗方式等收到了明显效果。到目前在查出的名患者中已有人治愈。其中五间房村已有人治愈康复。受到妇女姐妹的赞誉。

×尽管计生优质服务为妇女儿童保健工作做了一些努力和偿试，也受到了广大妇女的认同，但我们深知在具体的工作中与先进单位相比和上级领导的要求，特别是妇女姐妹的希望相差甚远。因此我们将在今后的工作中，积极借鉴兄弟单位的经验做法，努力做到取长补短，同时以更加严肃认真的态度，贯彻落实上级领导部门的指示精神，履行好我们的职责，为妇女儿童保健工作做出努力。

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××（）计生办

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【关键词】云南省 小语种 老挝语

【中图分类号】H411 【文献标识码】A 【文章编号】1674-4810（2013）17-0073-02

随着云南省桥头堡建设的不断推进以及云南省和东盟国家之间基础设施建设的不断完善，对小语种人才的需求也日益增多，小语种成了社会、家长和学生的“香饽饽”，但本人通过对老挝语已毕业学生以及在老挝投资企业的调查发现，大部分学生都觉得在学校学的在工作中很少能应用得到，很多企业也觉得学校在培养小语种学生时课程结构太单一，很多学生知识面太窄，应有针对性地开设相关课程。基于以上原因，作为一名小语种教师，本人对小语种人才的培养（以老挝语为例）从学校和学院、教师以及学生三方面做了一些思考。

一 学校和学院应为小语种人才的培养创造良好的条件

在老挝投资的企业大部分都是开矿、水利水电开发、农业开发、基础设施建设等，如果学生不扩大自身的知识面和能力，在企业里就不可能有发展，只能一直充当翻译的角色，所以学校和学院在以下几个方面应该给学生建立一些基础。

1.学校在小语种学院公共课的设置上应区别于其他学院

通过本人对在老挝投资的许多企业负责人的调查发现，他们希望学生在校的时候能多学一些财务、人力资源管理、国际贸易、物流、国际法、税收等知识，而不是单纯的语言。在老挝投资的企业，财务系统都是老挝的财务系统，财务用中国人又有语言问题，现在在老挝工作的毕业生财务方面都是边管边学，如果学生在校期间有相应的基础，毕业之后再经过企业在老挝的专门培训加上自身的语言优势很快就能掌握；在老挝的劳动力基本上都是老挝人，如果学生在校期间对管理有一定的理论基础，加上工作后的实践，无疑又给自己在企业的发展增添了一样法宝，这也正是企业想要的人才。另外，在法律、物流、税收等方面在校期间同样要有扎实的理论基础，特别是法律方面，不管是老挝的法律、中国的法律，还是国际法律都应该有一定的了解。

2.学校、学院应加强对小语种学生英语的教学

据本人调查发现，目前各高校英语的教学大部分是针对大一、大二的学生，而且每周的课时也非常少，大部分只能靠学生的自学，而这部分学生只占少数，学院应对小语种学

生每年的英语四、六级过级做出相应的要求，必要时应制定相关的规章制度，比如，大一、大二英语没有过四级的不给予出国学习，过了六级的给予相关的奖励，组织并鼓励学生参加各级别的英语比赛等，以此来帮助学生的英语学习。东南亚国家英语普及程度相对较高，小语种中有很多的外来词都是英语，加强英语的学习以及培养对英语学习的兴趣对提高东南亚语种的学习很有帮助，而且现在的用人单位对小语种学生的英语水平要求也很高，在老挝投资的很多央企、国企以及其他很多公司过来招人的时候明确要求英语要过四级或六级才能进入面试，因此，英语在一定程度上也成了小语种学生就业的敲门砖。

3.学院应支持并组织小语种学生和东南亚学生的交流

学生在课堂上学了之后不说、不用很快就会忘记，学了之后就去说、去用，很快就会记住单词，而且在使用的过程中又会发现新的问题，这样在学习的时候就很有目的。这一点上可以借鉴英语角，很多英语专业的学生毕业后使用英语工作的大部分都是从英语角或类似于英语角这样的交流中学出来的，在交流中他们发现问题、解决问题，而且能从交流中获得一种自豪感，就加大了学习外语的兴趣。随着现在东南亚学生在昆明学习人数的不断增多，应利用好这一资源，其实东南亚国家的留学生也有这一方面的需求，他们也想结交中国朋友，帮助他们学习中文，而各高校中学习小语种的学生应该就是最佳人选了。以老挝留学生为例，目前老挝留学生在昆明学习的就有三四百人，他们就读于不同的高校，由老挝留学生协会统一管理，学院应与类似老挝留学生协会的其他东南亚留学生组织建立联系，定期为学习东南亚语种的学生和东南亚国家的留学生创造相互学习、相互交流的机会，这样对学生口语的提高、专业的学习以及对对象国文化、风俗的了解都将会起到非常重要的作用，在这期间，东南亚国家的留学生的中文、对中国文化的了解也会不断地提高。

二 教师应加强学习研究并为小语种人才的培养注入新的活力

1.加强自身的学习

根据小语种学生毕业后的就业方向，加强在这些领域的学习。比如老挝语的学生毕业后基本上都是到水利公司、橡胶公司、农业类公司、矿产公司等就业，教师就应该有针对性地进行教学，加强对这些方面知识的学习以及学习这些领域的相关词汇或引导学生往这些方面学习，让学生在校期间对这些知识、词汇有一定的了解。

2.结合实际，加强小语种教材的编写

目前，小语种教材大部分都面临着教材老化的问题，与实际结合的很少。以老挝语教材为例，目前各书店销售的老挝语教材非常少，而且用的教材都是很早以前编写的，跟学生毕业后实际工作结合的很少。因此，教师应加强与东南亚高校教师以及国内高校教师的合作，加紧东南亚语种教材的编写工作，加强教材的适应性。

3.加强和往届毕业生的交流，必要时应开展相关的调研

小语种人才的培养不能按部就班地进行，社会以及用人单位每年对学生的要求都不同，因此也就要求教师在教学过程中应适应这种变化，教学内容该怎么变，该变什么，这些答案都可以从往届毕业生中找到答案，比如说在老挝投资的企业主要集中在农业、水利、矿藏、贸易等方面，教师在教学过程中就应从这些方面进行老挝语教学，当然这些都需要教师自身不断学习，必要时应跟往届生学习，教师把这些信息传递给在校学生，学生毕业之后就能很快进入工作状态，知识面也就不会太狭窄了。当然除了语言方面，往届毕业生也会反馈他们工作之后遇到的问题，教师把这些共性问题又反馈给在校生，这样就把这些问题在在校期间解决了，培养出学生的质量也就会越来越好。往届毕业生是一个很好的资源，他们能结合实际帮助教师在小语种教学过程中解决很多实际问题，从而提高小语种学生的知识水平和就业实力。

三 学生应加强自学意识并努力扩宽自己的知识面以及培养各方面的能力

1.学生应加强自学意识，不能只满足于教师的课堂教学

课堂教学的时间毕竟有限，教师介绍的知识也不可能面面俱到，学生应用好网络以及在昆明学习的东南亚学生等资源以提高专业和加深对对象国历史、文化等各方面的了解。中国驻老挝大使馆网站上有很多中老合作、中老互访、老挝经济政策、老挝风土人情等信息；通过大使馆网站又可链接老挝国会、外交部、商务部、老挝人民报等网站，在学习老挝语的同时能及时了解老挝党和政府的相关政策；中国国际广播电台网页有很多资料和听力材料。另外，目前在昆明学习的东南亚学生很多，学生应多去跟这些留学生交流，互相学习，相互提高。学校、学院的图书馆内有很多介绍对象国文化、风俗以及其他方面的书籍，学生自己应强制要求自己一个月最少要看完两本对象国的书籍，在了解对象国相关情况的同时也丰富自己的词汇。

2.在打好专业基础的同时，不断扩宽自己的知识面

很多已参加工作的小语种学生都反馈回一个问题，就是觉得小语种学生的知识面太窄，只会对方的语言，其他方面的知识太弱，如对对象国的历史、文化、风俗等了解甚少。这些问题都是跟学生在校学习时自学意识和学习主动性不够有关，学生应通过现在的网络和资格培训以及各个高校的资源，如各高校开设的讲座等去拓宽自身的知识面，而不能只满足于只局限于专业知识。老挝语的学生到外企工作之后，公司都会对学生进行会计、财务等培训，如果学生在校期间对会计、财务等知识有所了解，通过会计、财务等的资格考试，工作之后就能很快上手，自身的综合能力也会有所提高。

3.通过在校时的各类活动以及社会活动等培养自己各方面的能力

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关键词：半夏；悬浮细胞；生物碱；茉莉酸甲酯；水杨酸

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.01.021

中图分类号：R282.6 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）01-0087-04

Effects of Abiotic Elicitors MeJA and SA on Alkaloids Accumulation and Related Enzymes Metabolism in Pinellia ternata Suspension Cell Cultures DUAN Yong-bo， LU Fang， CUI Ting-ting， ZHAO Feng-lan， TENG Jing-tong， SHENG Wei， ZHANG Ai-min， XUE Jian-ping （Key Laboratory of Resource Plant Biology of Anhui Province， College of Life Sciences， Huaibei Normal University， Huaibei 235000， China）

Abstract： Objective To study the effects of abiotic elicitors methyl jasmonate （MeJA） and salicylic acid （SA） on the alkaloids accumulation and related enzymes metabolism in Pinellia ternata suspension cell cultures. Methods Using the leaf petioles-derived suspension cell cultures as the study object， the culture duration， concentrations of MeJA and SA were determined to get the optimal alkaloids accumulation， and the activities of metabolic enzymes IMP dehydrogenase and sAMP synthase were also measured. Results A 9-fold of dried biomass and a 3-fold of alkaloids accumulation were observed in P. ternata suspension cell cultures after culture for 21 d. Both MeJA and SA could significantly promote the accumulation of alkaloids in P. ternata suspension cells. 150 ?mol/L MeJA enhanced alkaloids content （4.7 mg/g DW） by 3.6 folds in comparison with control group， whereas 50 ?mol/L SA showed a 2.5-fold increase. Meanwhile， 100 ?mol/L MeJA and 50 ?mol/L SA promoted the increase in IMP dehydrogenase activity by 3.0 and 3.7 fold respectively， and 150 ?mol/L MeJA and 100 ?mol/L SA showed the increase by 2.6 and 4.4 fold respectively. Conclusion Proper adding exogenous MeJA and SA can promote the accumulation of alkaloids in Pinellia ternata suspension cell cultures.

Key words： Pinellia ternata； suspension cell cultures； alkaloids； methyl jasmonate； salicylic acid

半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.为天南星科

基金项目：国家自然科学基金（31501368、81573518）；安徽省自然科学基金（1408085MC58、1608085MC52）；安徽高校省级自然科学研究项目（KJ2016B016、KJ2015ZD35）

通讯作者：薛建平，E-mail：

多年生草本植物，其药用功效最早记载于《神农本草经》。半夏以块茎入药，具有燥湿化痰、止咳镇痛的作用，已成为我国最常用的十大中药之一[1]。半夏富含生物碱、β-谷甾醇、多糖、挥发性油等，其中生物碱被视为其主要活性成分[2]。在半夏生物碱中，胡芦巴碱含量常被作为半夏质量控制指示，肌苷则用作半夏的鉴别性成分[3-4]。

作为大宗中药材，半夏年需求量达500～600万kg，而野生和人工栽培产量仅能满足1/3，市场缺口很大[5]。自然状态下，半夏极少进行有性生殖，主要通过珠芽或块茎进行营养繁殖，繁殖系数低[6]。长期过度采伐导致野生半夏资源濒于枯竭，而人工栽培依然面临高温、干旱、病虫害以及人工成本等多方面因素的影响，难以满足半夏药材的市场需求。

悬浮细胞可在人为控制条件下实现活成分的生产，为解决药用植物资源不足和成本控制提供了新途径[7]。茉莉酸甲酯（MeJA）和水杨酸（SA）为重要的信号分子[8]，常被用于植物次生代谢途径研究。本研究以半夏悬浮细胞系为研究对象，考察外源MeJA和SA对生物碱合成和相关代谢酶活性的影响，以期为利用半夏悬浮细胞系生产生物碱提供依据。

1 仪器与试药

YXQ-LS-50A立式压力蒸汽灭菌器，上海博迅医疗生物仪器股份有限公司；HJH-C2112C超净工作台，上海智城分析仪器制造有限公司；QHZ-98B全温度光照震荡培养箱，太仓市华美生化仪器厂；BSA224S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；752紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；GZX-9240MBE电热恒温鼓风干燥箱，上海博迅医疗生物仪器股份有限公司；KQ-500超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH 5.4）、氯仿及溴麝草酚蓝标准溶液，购自生工生物工程（上海）股份有限公司；6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、6-糠氨基嘌呤（KT）、茉莉酸甲酯（MeJA）、水杨酸（SA）及盐酸麻黄碱等试剂均为Sigma-Aldrich产品。试验所用半夏植株采自淮北市龙脊山自然风景区（E-116°23′，N-34°14′），经薛建平教授鉴定为宿半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit。

2 方法与结果

2.1 半夏悬浮细胞体系构建

半夏愈伤组织诱导培养基为MS+3%蔗糖+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2，4-D+2.0 mg/L KT+0.65%琼脂，pH 5.8；细胞悬浮培养基为MS+3%蔗糖+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2，4-D，pH 5.8[9]。愈伤组织诱导培养条件为25 ℃黑暗培养；悬浮细胞培养条件为（23±1）℃，光照周期为14 h/10 h光暗交替，光照强度为3000 lx。

取半夏叶柄置于0.1%氯化汞浸泡6 min，无菌水润洗5次后剪成约1.0 cm长段，接种至愈伤诱导培养基，于25 ℃黑暗培养。3周后获得愈伤组织，将所获愈伤组织继代培养3～5次。选取质地松脆的颗粒状愈伤接种至液体培养基进行悬浮培养（100 r/min），每15 d更换新培养基，直至获得稳定细胞系。将所获细胞系在8 ℃低温处理24 h，然后于25 ℃恢复培养36 h使细胞周期同步。之后在23 ℃培养9 d使同步化细胞进入对数生长期，获得半夏悬浮细胞系。

2.2 盐酸麻黄碱标准曲线的绘制

精密称取10 mg盐酸麻黄碱对照品溶解于氯仿中，定容至50 mL，摇匀，得0.20 mg/mL盐酸麻黄碱对照品溶液。精密吸取0、1、2、3、4、5 mL至分液漏斗内，添加蒸馏水补至5 mL，分别精密加入5 mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH 5.4）、10 mL氯仿及1 mL溴麝草酚蓝标准溶液，充分振摇后静置1 h，分取氯仿层，水层再用氯仿重复萃取2次，每次10 mL。合并氯仿层，60 ℃水浴回收至干，用氯仿溶解，定容至10 mL[10]。于414 nm波长处分别测定其吸光度。以盐酸麻黄碱浓度（C）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标，求得标准曲线为A=0.062C-0.076 8，r2=0.996 0（n=5）。

2.3 生物碱含量测定

整个培养周期持续28 d，每隔7 d取样，所获样品立即保存于-70 ℃冰箱供测试分析。将所收集悬浮细胞样品于50 ℃干燥后研磨成粉。准确称取0.1 g样品粉末置于25 mL具塞试管中，加浓氨水0.5 mL润湿，加氯仿10 mL后于4 ℃冷浸3 h；冰浴超声提取1 h后过滤，残渣以10 mL氯仿分3次（4、3、3 mL）洗涤；将滤液与洗液合并，回收氯仿至干，加入10 mL氯仿使其溶解并转移至50 mL分液漏斗中，精密加入5 mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH 5.4）和1 mL溴麝香草酚蓝标准溶液，充分振摇后，静置1 h。分取氯仿层，水层再用氯仿同法萃取2次，每次10 mL。合并氯仿层，回收至干，残留物用氯仿溶解，置于10 mL容量瓶中，并用氯仿定容、摇匀，即得处理组溶液[11]。取待测溶液2.0 mL，用DU730 Beckman Coulter核酸蛋白分析仪测其吸光度，代入盐酸麻黄碱标准曲线中，计算生物碱的含量。

2.4 培养时间对悬浮细胞系生物量和生物碱含量的影响

以半夏叶柄为外植体诱导愈伤组织，进行液体悬浮培养，获得半夏悬浮细胞系。随着培养时间延长，悬浮细胞干重总体呈现增长趋势，在21 d时细胞干重为培养前9倍，之后有所下降（见图1）；生物碱含量在培养7 d内含量较低，到14 d时显著增加，21 d时最高，达到1.56 mg/g DW，之后生物碱含量开始降低（见图2）。当培养时间超过28 d后，悬浮细胞会逐渐变为褐色，开始坏死。根据细胞生物量和生物碱含量测定结果，选择21 d作为悬浮细胞培养时间。

2.5 茉莉酸甲酯和水杨酸对生物碱含量的影响

试验用MeJA和SA浓度均为0、50、100、150、200 ?mol/L。MeJA处理对半夏悬浮细胞系生物碱含量有显著影响。除50 ?mol/L处理外，所试其他MeJA浓度均显著促进半夏生物碱合成。以150 ?mol/L MeJA处理组最高，达到4.7 mg/g DW。150 ?mol/L MeJA处理组的生物碱含量为对照组的3.6倍。在SA处理中，50和100 ?mol/L可显著提高半夏悬浮细胞系中生物碱的合成，更高浓度的SA则能促进生物碱的累积。50 ?mol/L SA处理组生物碱含量最高，为对照组的2.5倍。结果见图3。

2.6 茉莉酸甲酯和水杨酸对IMP脱氢酶和sAMP合成酶活性的影响

在添加不同浓度MeJA或SA培养21 d后，测定半夏悬浮细胞中IMP脱氢酶和sAMP合成酶活性。取不同浓度外源激素的半夏悬浮培养细胞各1.0 g置于预冷的研钵中，加提取介质在冰浴中研磨匀浆，4 ℃、1000 r/min离心15 min，上清液为酶粗提取液。将上述酶提取液加入相应的酶反应液，每隔30 s读取吸光度值。酶活性以比活力表示，定义为1 min内1 mg蛋白所能引起的吸光度值变化的1000倍[5]。

添加MeJA或SA均对IMP脱氢酶活性有显著影响。50～150 ?mol/L MeJA为对照组IMP脱氢酶活性2.6～3.1倍，当MeJA浓度增加至200 ?mol/L时，酶活性有所下降；50 ?mol/L SA处理对IMP脱氢酶活性影响最大，酶活性为对照组3.7倍，随浓度增加酶活性逐渐下降。结果见图4。

对于sAMP合成酶，50 ?mol/L MeJA对酶活性无显著影响（P>0.05），而较高浓度的MeJA显著提高酶活性（P

3 讨论

生物碱为重要的次生代谢物，是许多药用植物的主要活性成分。目前多种药用植物细胞内生物碱合成及代谢规律逐步得以揭示，对于研究这些植物的药用成分意义重大[12]。在诸多研究模式中，悬浮细胞系的应用极为广泛[13-14]，因其可为药用成分的生产提供另一途径，有助于解决药用植物产量的缺口，获得更高质量的产品，同时保护野生资源。

本研究以叶柄来源的愈伤组织建立半夏悬浮细胞系，考察不同培养时间、MeJA和SA浓度对细胞中生物碱含量的影响，并分析生物碱合成相关酶活性。

在悬浮培养21 d时，半夏悬浮细胞干重增加了9倍，悬浮细胞中生物碱总量为培养0 d时的3倍，与Zhao J等[15]报道长春花悬浮细胞培养增殖结果接近。生物碱作为一种重要的次生代谢产物，其合成通常在细胞培养后期进行。添加较低浓度MeJA或SA不会影响半夏悬浮细胞的增殖，这在麻花艽悬浮细胞培养中同样得到验证[16]。同时，培养3周左右通常需要更换新鲜培养基，以补充营养成分并减少坏死细胞对培养的影响。因此，确定悬浮细胞系培养时间为21 d用于不同诱导子对生物碱累积影响的研究。

MeJA或SA作为重要的诱导子已用于萜类化合物等生物碱的代谢研究[17]。本研究表明，MeJA或SA处理均能显著促进生物碱在半夏悬浮细胞中累积。培养21 d后，150 ?mol/L MeJA处理组生物碱含量为对照组3.6倍，50 ?mol/L SA处理组悬浮细胞生物碱含量达到对照组的2.5倍。同时测定了生物碱中嘌呤核苷酸生物合成途径中的关键酶IMP脱氢酶和sAMP合成酶活性的变化情况。添加MeJA或SA均能显著提高二者的酶活性。100 ?mol/L MeJA、50 ?mol/L SA处理使IMP脱氢酶活性分别为对照组3.0、3.7倍，150 ?mol/L MeJA、100 ?mol/L SA处理使sAMP合成酶活性分别为对照组2.6、4.4倍。比较生物碱累积量及所测代谢酶活性变化情况发现，生物碱累积与所测代谢酶活性变化趋势较一致，说明IMP脱氢酶及sAMP合成酶在半夏生物碱代谢中具有较为重要的作用。

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篇5

服务外包产业是智力人才密集型现代服务业，具有信息技术承载高、附加值大、资源消耗低、环境污染小、国际化水平高等特点。大力培养服务外包人才，提高高校毕业生就业能力，有利于加快经济发展方式的转变，促进区域经济协调发展，优化外贸结构，提高利用外资水平，对全面贯彻落实科学发展观，实现“保增长、扩内需、调结构”的目标具有重要意义。

二、明确服务外包人才培养工作的目标

高校要根据服务外包产业快速发展的需要，调整服务外包人才培养结构，扩大服务外包人才培养规模，着力提高人才培养质量。服务外包产业涉及软件研发、产品技术研发、工业设计、信息技术研发、信息技术外包服务、技术性业务流程外包等领域，各类高校要在相关专业开展服务外包人才培养工作，在高职高专、本科、研究生等层次培养高质量的服务外包人才，力争在5年内培养和培训120万服务外包人才，新增100万高校毕业生就业，实现2013年承接国际服务外包业务300亿美元。

三、建立服务外包人才培养培训体系

商务部和教育部负责联合认定中国服务外包示范城市设立的“服务外包人才培训中心”，并制定“服务外包人才培训中心”、社会培训机构、从业人员等标准。“服务外包人才培训中心”负责组织协调当地高校、社会培训机构、服务外包企业开展服务外包人才培养、培训和实训、实习工作。各地要加强对“服务外包人才培训中心”、高校和社会培训机构的政策支持，采取有效措施提升培养培训质量，满足服务外包企业用人要求。高校和社会培训机构按照相关标准开展服务外包人才培养、培训工作。鼓励服务外包企业组织和接纳高校学生实习和社会实践。商务部和教育部定期公布服务外包企业录用各个高校和经社会培训机构培训的高校学生数量。商务部、教育部会同有关部门建立服务外包人才库，加强服务外包人才储备。

四、调整专业结构适应服务外包产业需要

地方所属高校的计算机科学与技术专业要以造就应用型人才为主要目标，大力培养服务外包人才。示范性软件学院和示范性职业技术软件学院要把培养服务外包人才作为一项十分重要的任务来完成，其中，示范性软件学院以培养高端服务外包人才为主，促进中国服务外包产业的总体创新能力和竞争实力的提升。“中国服务外包示范城市”的各类高校应在服务外包产业所涉及的专业增设服务外包专业方向。

五、采取灵活措施培养服务外包人才

高校要根据服务外包产业所涉及专业的特点，采取灵活措施，按照国际先进技术和全球化的理念，探索多种模式培养服务外包人才。可在原有专业内开设服务外包专业方向，增设服务外包课程。可引入社会培训机构开设服务外包课程。可将服务外包企业的岗位培训前移至校内完成，帮助高校毕业生能够直接上岗工作。

六、加强高校学生实习实训工作

“中国服务外包示范城市”设立的“服务外包人才培训中心“，要按照商务部和教育部联合制定并的有关标准，认定符合条件的服务外包企业、社会培训机构和高校为“服务外包大学生实训实习基地”，实习实训质量需得到参加实习实训高校和企业的认可。高校要积极改革原有的实习模式，与服务外包企业共同制订实习方案，共同指导学生实习。要签订学校、企业和学生的三方实习实训协议，保护学生的合法权益，不能加重实习实训学生的经济负担。服务外包企业要积极接收高校学生实习和勤工俭学。商务部、教育部将服务外包企业接收高校学生实习实训工作情况作为服务外包示范城市评价的重要指标之一。

七、深化高校与服务外包企业的合作

教育部和商务部将邀请“中国服务外包示范城市”人民政府、服务外包企业和高校，成立服务外包校企合作联盟，推进企业和高校的战略合作。参加合作联盟的有关企业和高校，在人才培养、产品和技术研发、高校毕业生就业等方面积极开展多边和双边合作。各地要加强对合作联盟的政策支持。合作联盟要促进人才交流，根据校企达成的共识，鼓励企业派遣工作经验丰富的专家到学校兼职，高校派遣教师到服务外包企业挂职。

八、建立服务外包课程教师培训网络平台

教育部将建立服务外包课程教师培训网络平台，充分利用合作联盟企业和高校的优质资源，大力培训服务外包课程教师。高校要将教师参加培训和到企业挂职计入教师工作量。

九、努力做好服务外包人才就业工作

要把推动服务外包产业发展促进高校毕业生就业放在突出重要的位置。各地商务、教育部门要按照每年促进服务外包领域全国新增20万高校毕业生就业的目标，制订本地区的具体工作目标及实施方案。商务部门要切实落实有关优惠政策，加强引导和服务，积极鼓励服务外包企业吸纳高校毕业生。教育行政部门要指导高校广泛联系并吸引服务外包企业到校园开展招聘活动；加强对毕业生的就业指导和宣传引导，积极鼓励高校毕业生到服务外包企业就业。服务外包企业和高校要充分利用全国大学生就业公共服务立体化平台、中国服务外包网等信息平台，及时高校服务外包相关专业及毕业生情况、服务外包企业招聘信息和接收高校学生实习的信息，增加高校毕业生到服务外包企业的就业机会。