茶艺方法精选(五篇)
发布时间：2023-10-12 17:40:01
序言：作为思想的载体和知识的探索者，写作是一种独特的艺术，我们为您准备了不同风格的5篇茶艺方法，期待它们能激发您的灵感。
篇1
关键词：茶艺；仪态；练习；有效
中图分类号：G633.3 文献标识码：B 文章编号：1006-5962（2013）08-0046-01
茶艺是一门内涵丰富，涵盖茶叶栽培、茶叶加工、茶叶冲泡、品茶养生、茶艺表演等多方面内容的学科，随着现代生活水平的提高，饮茶的人越来越多，人们对茶的要求也越来越高，从饮茶解渴到饮茶养生再到品茶赏茶艺表演，艺术元素的渗入，使茶人从嗅觉、味觉享受，扩延到视觉、精神享受。在茶艺表演过程除了茶叶量、水温、水量、杯具、冲泡时间等冲泡技艺外，得体优雅的仪态会使一杯好茶锦上添花，使品茶人进入了另一个艺术欣赏心灵涤荡的更高境界。
茶艺表演过程中，表演者既要进行一系列繁锁的冲泡动作，又要端茶给品茶者，所以仪态是茶艺表演的关键因素之一，在茶艺学习课程上，本人认为有必要安排2到6个课时进行表情、坐姿、站姿、步姿、手势等仪态的练习，不可只局限于老师的口头讲述示范、视频的观摩。如何利用好有限的课堂时间进行有效的练习，本人将从练习意识、练习场所、练习方法、练习过程、考核方法等多方面来探析有效练习课堂的开展。
1 引导学生找出差距
只有同学们思想上认同了仪态在茶艺表演中的重要性，找出自己的不足，同学们才会主动认真练习，才会在行动中实践，才能使练习的有效性提高。所以我们在进行仪态课之前，要先引起同学们的共鸣，我们可以用手机或相机摄影几个同学的冲泡过程，然后播放给大家看，再播放茶艺师的茶艺表演，让同学们对比点评找出差别，因同学们是初学者，与茶艺师的表演仪态肯定会存在很大差距，引导同学们认识到自己的不足，不敢忽视接下来的仪态练习。
2 选好练习场所
一般的茶艺课堂在课室或茶艺室内进行，但仪态课，我们最好选择在形体舞蹈室，因为形体舞蹈室四面墙壁有镜子，学生练习时，可以在镜子里看到自己的姿势仪态，更容易找出自己的仪态优缺点，学习速度更快，这对练习的有效性事半功倍。
3 设计好练习方法、掌控好练习过程
老师示范了正确的姿势后，就到学生练习了，开始练习前，就告知学生练习结束后将进行小组仪态比赛，选出每组的仪态大使和本班的冠亚季军，利用学生的表演欲和不甘落后的自尊心，进一步挑起学生的练习热情。
至于练习方法，如果让学生在课堂上自由练习，很容易出现靠边站聊天的懒散现象，本人认为要采用集体统一练习，且不同的学习内容练习过程也应不同。
微笑表情：我们可以把学生分成几个小组，分小组时尽量以宿舍为单位来分，因为放学后，学生回到宿舍，相互交流时很容易聊起课堂练习情景，相互之间有更多共同语言，并在交流中很自然地进行练习，让练习课堂延伸到宿舍，且每小组选出的仪态大使就是本宿舍成员，更有亲切感，也会使学生感到仪态大使就在身边，时刻要注意仪态。
老师示范结束后，让学生脸朝镜子练习微笑，在镜子中找出不露齿和露齿的最好看的微笑，以及微笑时的目光，老师需在旁叫口令"一二三，开始微笑，1、2、3……10"，老师通过数数强迫每个学生都练习。让学生休息几秒后，这样的数数练习可再进行，如此重复几次后，就进入下一内容的练习，重复的次数不可太多，因为次数多了，学生会觉得枯燥无味，变成应付式的练习，而不是有效的练习。
站姿：老师示范完后，可采用微笑练习的方法，让学生分成几个小组分别脸朝向镜子，老师进行数数的强迫性练习，数数的过程，老师可不能闲着，应到站姿不好的学生旁给以指正。因为女性脚的方向可以左丁、右丁、小八字几种站法，手也有几种摆放，所以在练习过程中要把不同的站法也要练习上几遍。尽量让学生在课堂上就牢固掌握各种站姿。练习站姿时应要求学生配以微笑的表情。
步姿：步姿涉及的手脚动作多，老师示范和学生练习都应分解各动作。如手臂摆动，动作是肩膀和上半身不动，双臂自然下垂，手掌心向内，手臂以身体为中心前后摆动，女性手臂与身体的夹角约10°-15°，可让学生站在原地，只进行手臂的摆动练习，我们还是采用统一的数数强迫练习。又如脚步的跨步练习，除了分解动作还应放慢动作，让学生找到跨一步的一只脚或1.5只脚的距离是多少，还应在地面画两只脚宽的平行线，让学生在平行线上走，找出两只脚沿平行方向走的感觉，规避外八字内八字的不雅走姿。分解动作练习完进行连环动作练习时，为方便老师看清每个学生的情况，最好把学生分成几列，一列一列的单独进行。练习步姿时应要求学生配以微笑的表情。
坐姿：因为茶艺表演时大部份时间是坐着进行的，所以坐姿应作为练习的重点，练习所占时间应较长。老师一定要把坐姿入座离座等内容作详细的分解讲解并一一作示范，一定要让学生明晰每个身体部位的动作要领，学生练习时也要对各分解动作一一练习，同时，坐姿脚的放法和手的放法有多种，所以在练习过程要对每种坐法进行练习。
准备每人一张椅子，可参考微笑练习的方法，让学生分成几个小组分别脸朝向镜子，进行数数的强迫性统一练习，练习坐姿时应要求学生配以微笑的表情。
所有内容练习完后，可以进行比赛，一组一组的进行各种姿势仪态的展示，结合同学们的意见和老师的意见选出每组的仪态大使和本班的冠亚季军。
4 利用好考核方法
为了增加学生对练习的重视，可在练习课结束后，马上安排时间对练习的几种姿势仪态内容进行考核，考核成绩作为学科成绩的一部份。
良好的仪态会给人一种美的享受，良好的仪态在茶艺表演中给人一种欣赏艺术的享受，所以我们在茶艺课堂教学中不可忽视对学生仪态的教学，为了使学生牢固掌握此内容，我们一定要重视课堂练习的有效性，我们要从培养练习意识、选好练习场所、设好练习方法、控好练习过程、用好考核方法等多方面入手，提高茶艺表演仪态课堂练习的有效性。
参考文献
[1] 刘勤晋.茶文化学[M].北京：中国农业出版社，2010.
[2] 范增平.茶艺美学论[A].广西民族学院学报（哲学版），2012.
篇2
2、移植换盆：可于新芽萌发前移植或换盆为宜；约于11月至3月间。
3、灌溉给水：喜湿润、排水良好。故应适时给水，尤其应防夏季缺水的西晒乾燥现象或建物辐射热伤害，以免妨害其生长。当花芽分花时，更不可断水、缺水，以免著花不易或引起落花。
4、施肥：可以有机质肥为主供应：骨粉、草木灰、油粕。或过磷酸石灰、氯化钾。其n—p—k比为：5—3—2，开花后可施重肥，5～7月花芽分化期间忌施肥，尤其是氮肥，以免仅萌发叶芽。
5、摘蕾：茶花的花芽分化多为六月间，但摘蕾时须视花蕾如黄豆一般大小时约在9～11月间才可进行。摘蕾的原则为：每节花芽仅留一个花蕾为原则，且其花蕾须朝上，并不可伤及新芽。
6、花后处理：12～1月间：花后应尽早除去残花，并立即追肥，在支干基部起仅保留2～3节新芽，其余顶端可去除。4～5月间：须减少供水，使新芽所生长之枝条不会过分伸长，以免后续之花芽分化的萌花蕾数减少。
篇3
为贯彻落实市纪委九届八次全会、市政府廉政工作电视电话会议和全市推进惩治和预防腐败体系建设工作会议精神，进一步推进依法行政，根据省监察厅《关于在全省住房与城乡建设和国土资源系统开展依法行政综合监察工作的通知》（监发[]2号），经市政府同意，决定在全市建设、规划、房管、城管执法和国土资源系统开展依法行政综合监察工作。
一、监察任务、内容和重点
（一）监察任务
按照分级监察的原则，对市、县（市）区两级建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门，年以来依法履行职责的情况进行全面监察，促进五个部门深入推进依法行政，规范行政权力运行，有效发挥行政监管和服务职能，防止滥用权力。
（二）监察内容
1、检查各级建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门年以来在实施行政管理中，是否依法履行行政许可、规划、处罚、强制、确认、裁决、征收、给付、复议和监督检查等职责。具体包括：
——是否合法行政，有否存在越权、失职渎职的问题；
——是否合理行政，有否存在不公平、不适当和滥用自由裁量权的问题；
——是否程序正当，有否存在应公开不公开、应告知不告知、应回避不回避等违反法定程序的问题；
——是否高效便民，有否存在超时限、推诿扯皮、效率低下及违反便民规定的问题；
——是否廉洁自律，有否存在乱收费、的问题。
既要对具体行政行为进行检查，也要对抽象行政行为进行检查，全面掌握被监察部门依法行政的情况。
2、根据检查结果，对依法行政的好经验、好做法予以总结推广；对违法违规和违反政策规定的问题，督促纠正和整改；对违纪问题，依纪依法进行调查处理。
（三）监察重点
1、对建设行政主管部门，重点监察城市建设管理、工程建设质量、安全管理、工程建设项目招投标监管、资金规费收支管理、建筑业资质管理。
2、对规划行政主管部门，重点监察城乡规划管理。
3、对房管行政主管部门，重点监察城镇房屋拆迁、房地产管理、物业管理。
4、对城管执法行政主管部门，重点监察城市管理行政执法、市容和环境卫生管理、内河管理、市政管理。
5、对国土行政主管部门，重点监察用地审批、土地出让、土地开发整理、土地违法违规案件查处；探矿权、采矿权审批与出让；资金规费收支管理。
二、监察工作安排及方法步骤
（一）工作安排
5月至9月，各级监察机关及其派驻建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门的监察机构，对本级建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门进行综合监察。各县（市）区监察局于9月20日前，向市监察局报送本辖区开展建设、规划、房管、城管执法和国土资源系统综合监察工作的情况报告。市监察局于9月30日前，向省监察厅报送本辖区开展建设、规划、房管、城管执法和国土资源系统综合监察工作的情况报告。
（二）方法步骤
1、各级监察机关向本级建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门发出监察通知书，告知监察内容、重点、时间等事项，请其做好相关准备工作。
2、实施检查，形成检查报告。具体检查方法：
——听。通过召开汇报会、座谈会和个别听取意见等形式，向建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门及其管理相对人了解依法行政的情况，听取意见、建议。
——阅。查阅建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政管理的相关工作资料，包括：制定出台的规范性文件；有关行政规划、许可、审批、确认、裁决的档案资料；受理投诉、查处案件、办理行政复议等行政执法的卷宗资料；有关规费的征收、上缴和补助的分配、使用的凭证、账册和批文；其他有关资料。
——看。现场查看建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政服务窗口、基层所站的工作运作情况。
——理。在建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门及其办事窗口公布举报电话，认真受理并调查核实群众投诉、反映的有关问题。
3、根据检查结果，充分运用监察建议书、决定书等监察手段，认真行使建议权、处分权等监察职权，抓好经验总结、问题整改、案件查处等事项，确保推进依法行政目标的实现。
4、向本级人民政府和上一级监察机关书面报告开展综合监察工作的情况。
三、监察工作的主要依据
（一）建设
《中华人民共和国建筑法》、《中华人民共和国招标投标法》、《中华人民共和国城市房地产管理法》、《建设工程质量管理条例》、《建设工程勘查设计管理条例》、《建设工程安全生产管理条例》、《住房公积金管理条例》等。
（二）、规划
《中华人民共和国城市规划法》、《省实施〈中华人民共和国城市规划法〉办法》等
（三）、房管
《中华人民共和国城市房地产管理法》、《中华人民共和国物权法》、《城市房屋拆迁管理条例》、《市城市房屋拆迁管理办法》等
（四）、城管执法
《省城市市容和环境卫生管理办法》、《市市容和环境卫生管理办法》等
（五）、国土资源
《中华人民共和国土地管理法》、《中华人民共和国矿产资源法》、《中华人民共和国土地管理法实施条例》、《基本农田保护条例》、《中华人民共和国城镇国有土地使用权出让和转让暂行条例》、《划拨土地使用权管理暂行办法》等。
（六）综合
《中华人民共和国行政监察法》、《中华人民共和国行政监察法实施条例》、《中华人民共和国行政处罚法》、《中华人民共和国行政复议法》、《中华人民共和国行政许可法》等。
四、监察工作要求
（一）加强领导。开展依法行政综合监察是加强对行政权力运行的监督，推进依法行政的重要措施，对加强廉政勤政建设，优化发展环境，促进经济社会发展具有重要意义。各级监察机关要把开展建设、规划、房管、城管执法和国土资源系统综合监察作为今年执法监察的重要任务，列入重要议事日程，切实加强领导。要按照综合监察的任务、内容和重点，结合本辖区建设、规划、房管、城管执法和国土资源系统实际，制定工作方案，认真组织实施。要抽调素质高、能力强的干部组成监察组，充分发挥派驻机构的作用，确保综合监察工作深入开展。要向政府报告综合监察方案及其结果，实施中遇到重要情况和重大问题要及时向政府请示，取得政府的指导；要向建设、规划、房管、城管执法和国土资源行政主管部门宣讲综合监察的目的、意义，取得他们的理解、支持和配合。市监察局分别组成建设、规划、房管、城管执法和国土资源5个系统依法行政综合监察组，组长由市监察局分管副局长担任，副组长分别由市纪委监察局执法监察室主任和市纪委驻市建设局、市城市规划局、市房管局、市城管执法局、市国土资源局纪检组组长担任，负责综合监察工作的组织实施。
（二）依法监察。各级监察机关要严格依照《行政监察法》及其《实施条例》、《省监察机关检查工作办法》开展综合监察工作。在检查环节，要按照《省监察机关检查工作办法》的有关规定办理立项、实施检查、进行处理；在调查环节，要严格依照纪检监察机关办案程序进行审查、立案、调查取证、审理和执行。
篇4
关键词：数学教学；衔接；差异；方法
当前，“九年制义务教育”课程标准倡导“人人都能获得良好的数学教育，不同的人在数学上得到不同的发展”，使得初中数学教学普遍执行的是课程标准的基本要求，而淡化了为学生的升学而应做的必要准备。进入高中以后，其课程标准难度提高，教材内容多，导致了学生学习困难，教师较难进行有效教学。究其主要原因是二者差异较大。笔者从实践中深刻地体会到，解决此问题的关键是“关注差异，注重方法”，努力搞好初、高中数学教学的衔接。
一、关注差异，有的放矢
1.知识差异
初、高中数学有很多衔接的知识点。如命题、函数概念、不等式等。因此，在讲授新知识时，教师要引导学生复习和区别旧知识，注重对那些易错易混的知识点加以分析、比较，从而达到温故而知新的效果。例如，在学习一元二次不等式解法时，教师应引导学生回顾已学过的一元二次方程和二次函数的有关知识，如：根的判别式，求根公式，根与系数的关系，二次函数的图像等。初中数学知识少、浅、难度较低。高中数学知识面广，是对初中的数学知识推广、延伸和完善。如，初中学习的角的概念只是“0°～180°”范围，但实际当中有720°和“负300°”等角，为此，高中将把角的概念推广到任意角。又如，初中一个负数开平方无意义，但在高中规定了i2=-1，就使-1的平方根为±i。即可把数的概念扩大到复数范围。
2.教学差异
（1）初中课堂教学容量小、知识浅显，教师通过精讲多练，课后作业，反复练习，大多数学生能够掌握。而高中数学的学习随着课程开设多，课时减少，课外练习时间也相对减少，这样集中教学的时间相对比初中少，教师又很难像初中那样督促每个学生的作业和课外练习了。
（2）初中学生模仿做题，模仿老师思维推理较多，而高中学生也有模仿做题和推理思维，但随着知识广度和难度的增加，全部模仿难能维系了，为了避免学生高分低能，思维定式，提倡创新思维和培养学生的创造能力，已是高中数学教学的必然了。
3.自学差异
初中学生自学能力较低，但凡考试涉及的题目，基本上是教师耐心的讲解和学生大量的训练，学生很少自学。但高中的知识面广，要全部由教师训练完高考中的习题类型是不可能的，只有通过较少的、较典型的题例讲解让学生去融会贯通。如果不自学、不靠大量的阅读理解，学生将会一筹莫展。
二、注重方法，事半功倍
1.注重教学方法的衔接
（1）创设问题情境，揭示知识的形成与发展过程。在数学知识的讲授过程中，不仅要让学生知其然，更应让学生知其所以然，高中数学教学尤其如此。这就要求高中教师在初、高中数学教学衔接时，注意创设问题情境，讲清知识的来龙去脉，揭示新知识（概念、公式等）的提出过程，例题解法的探求过程，解题方法和规律的概括过程，使学生对所学知识理解得更加深刻。
（2）运用探究式教学，使学生主动参与。贯彻新课程理念，发挥学生的主体地位，让学生主动参与对数学的学习和思考，践行陶行知的“在做中学”理念。如在立体几何教学中，让学生课外制作棱柱、棱锥等几何体，感受几何体的形状和性质；在讲椭圆定义时，让学生画出椭圆，要比教师直接给出椭圆定义效果要好得多， 通过学生主动参与和探究式的教学，引发其好奇心和浓厚的兴趣，他们就会主动学习、积极思维，参与活动的同时也激发了想象力和创造力。
（3）重视知识归纳，培养逻辑思维能力。合理的知识建构，有助于思维由三维向多维发展，从而形成网络结构。在复习中要把握知识的内在联系，形成清晰的知识结构图表，以便理清概念，使其系统化、条理化，便于记忆及掌握运用，同时对所学的思维方法和解题方法也应进行分类总结，找出其共性与个性，学生的逻辑思维能力也就蕴涵其中，并得以有效的培养和提高。
2.注重学习方法的衔接
（1）要培养良好的学习习惯。良好的学习习惯，包括制订计划、课前自学、专心上课、及时复习、独立作业、纠错订正、质疑问难、系统小结和课外学习和反思习惯，从而提高自学能力、发现和分析、解决问题的能力。尤其是解完题目之后，及时回顾解题过程中是如何分析联想探索出解题途径的？使问题获得解决的关键是什么？通过解题后的回顾与反思，更有利于发现解题的关键所在，并从中提炼出数学思想和方法。因此，培养良好的学习习惯才能“站得高，看得远，驾驭全局，理想效果”。
（2）要夯实基础，探索规律。首先必须掌握好课本的基础知识，一切问题的解决都是建立在一个一个的最基础的知识点上的，如果连最基础的知识点都不会，那还如何解决问题呢？因此学数学同样需要记忆，并且是牢固的记忆。其次，在解决问题中探索规律，同一类型的题目，这次错了，下次就会做了，规律是总结出来的。可以从练习、例题中实践总结，还可以从一些经典易错题中归纳总结。规律理解和掌握得多了，就能像一把钥匙开一把锁，得心应手，迎刃而解啦。
处理好初、高中数学教学的衔接问题，是推进高中数学新课标教学的切入点和增长点，笔者虽然进行了一些有益的探索，但与落实新课标，培养新型人才的要求还有差距。“路漫漫其修远兮，吾将上下而求索。”关注差异，注重方法，有机衔接，有效发展，愿我们的高中数学教学更上一层楼，结出丰硕之果。
参考文献：
[1][苏]巴班斯基.教育过程最优化[M].吴文侃等，译.教育科学出版社，2001-01.
[2][美]D.鲍里奇.有效教学方法[M].易东平，译.江苏教育出版社，2002.
篇5
一、DD方法基本原理
DD的基本原理是将具有可比性的细胞在某一条件下可表达的mRNA群体通过逆转录方法变成相应的cDNA群体，以此为模板，利用一对特殊引物，即3anchor引物和5arbitrary引物，在一定条件下进行PCR扩增，得到与mRNA相对应的“标签”（tags），然后用变性聚丙烯酰胺测序胶分析其差别，将有差别的基因克隆化，进一步分析其结构与功能。DD依赖三种技术：（1）mRNA逆转录技术；（2）以特定引物进行的PCR技术；（3）DNA测序胶电泳技术。
二、DD方法的优点及其应用
用某一方法来寻找mRNA表达的差异，至少要满足下列要求：（1）在一定时间、空间里，每一个细胞约有15000种mRNA表达，其中除少数属高丰度表达外，大量的属于低丰度表达，即要求使用的方法足以显示低丰度mRNA；（2）重复性要好；（3）实验过程中能够步步验证比较（side-by-sidecomparison）；（4）得到的产物能代表相应的mRNAs或cDNAs，并能由此找到相应的cDNA序列；（5）省时，简便易行。
既往对mRNA的比较研究中多用减数杂交方法［4］（subtractionhybridization），该方法灵敏，可显示低丰度RNA，但是步骤复杂，需时较长，而且在得到最终结果前无法步步验证对照比较，故不易重复，并且需要大量的RNA作起始研究材料。这一点对RNA来源不易者（如手术活检标本）极不利［5，6］。
DD的优点在于：（1）仅需0.2μg总RNA作为起始材料；（2）可同时分析多组样品；（3）敏感性高，可检出低丰度mRNA；（4）实验周期短，约8天即可完成［7］，便于重复；（5）最突出的优点是实验过程中可步步验证比较。可简单地将DD的特点概括为“3SRV”，即“Simplicity，Sensitivity，Speed，Reproducibility，Versatility”。
DD方法因有上述优点，被广泛应用。例如：Musholt等［8］应用DD方法对手术切下的髓样甲状腺癌标本与局部转移的淋巴结进行了比较，发现了两个新的表达基因MDF-1和MDF-2，并认为这两个基因在髓样甲状腺癌的进展与转移中起了重要作用；Zuo等［9］研究溃疡性结肠炎的粘膜细胞，以正常结肠粘膜细胞作对照，找到了25个表达基因，其中有些与甲状旁腺瘤、T细胞受体-β、卵巢癌等表达的基因同源。
关于神经再生问题，Livesey等［10］发现了Reg-2基因，并认为该基因是哺乳类动物运动神经元再生的关键基因。
在骨科领域，也有许多用DD方法的研究，Ryoo等［11］找到了一个与成骨细胞表型发育有关的细胞增殖标志基因PROM-1（proliferatingcellmarker）。更令人鼓舞的是，Boden等［12］用一种新的骨形成蛋白LMP-1基因转染骨髓细胞，再作局部基因治疗，在动物实验中成功地进行了脊柱融合，LMP-1基因就是用DD方法克隆出来的。
此外，DD还应用于心血管病［13］、糖尿病［14］、胚胎发育［15］、先天性疾病［16］以及药理学［17］和眼科学［18］等。不仅用于动物和人类，还应用于植物分子生物学研究［19］。
三、存在的问题与对策
DD方法存在的问题概括起来有两方面：一是假阳性多（约50％～70％），二是得到的有差异cDN段短（约为110～500bp）。因为这两个问题，使许多研究者踟蹰不前，这也是Debouk［3］提出质疑的原因之一。
产生假阳性的原因，在于以下4个环节：（1）提取总RNA时，有染色体DNA污染，此DNA作为模板在PCR过程中被扩增；（2）从聚丙烯酰胺胶上挑选有差异条带时，实验组与对照组间信号对比不够显著；（3）在克隆阶段挑选阳性菌落时，未能排除基因克隆中的假阳性；（4）研究中多次使用PCR技术，很难避免实验室环境中的交叉污染。
解决这一问题的对策是：（1）提取RNA操作严格，得到的RNA必须经过脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)充分消化，去除染色体DNA污染。（2）从聚丙烯酰胺胶上切取有差异条带时，首选实验与对照间信号差异显者，最好是互为有或无的关系；如果仅仅是强与弱的关系，放在次选位置上。（3）即使是差异显著地显现为一条带，也不能肯定是由某一cDNA的均一分子泳动而成，有可能是结构不同而分子量相同的cDNA共泳动（Co-migrat）的结果。对此，可用mSSCP方法区别开来［7］。也可在基因克隆挑选时，用Reversenorthern原理作菌落原位杂交进行筛选［20］。（4）关于交叉污染问题的克服应服从分子生物学一般原则。（5）有差异基因的最终确认是用Northern杂交，如果选取了十几或几十条差异条带，用Northern杂交工作量太大，若用Reversenorthern杂交则比较简便［20］。
DD扩增片段较短(≤500bp)，且扩增片段多位于3UTR（3untranslatedregion）范围内，很少能扩增到ORF（openreadingframe）范围内。这一缺点是由使用的特殊引物所决定的，因此DD得到的是mRNA的标签（tags）；由此带来另一个问题，即这一位于3UTR范围的标签与Genebank数据库比较时，多数情况是与EST（expressionseguencetags）比较，常不能满足研究者的要求。
解决这一问题的对策是：（1）应用TargetedDD方法，基本原理是将5端引物延长，增加扩增片段的特异性［21，22］；或者用Stone和Wharton［23］报道的“targetedrNAfingerprinting”方法。这样有可能使扩增片段特异性高，减少假阳性率，同时可能在Genebank数据库中得到更多结构与功能方面的信息；（2）用得到的cDN段作probe筛选相应cDNA文库，得到cDNA全序列，以便于基因结构与功能研究。
四、展望
了解细胞在某一条件下的基因表达，对阐明生命过程(如生长发育与分化、细胞凋亡与衰老等生理过程)以及炎症、肿瘤、心脑血管疾病等病理过程极为重要。DD方法在应用中被不断完善，同时也有更新的技术问世，如DNAmicroarrays［24］，把大量寡核苷酸片段排列在相似于一种大规模集成电路式的生物芯片上，一次可完成数量相当可观的反应，提供的信息是目前所有基因表达研究技术不可比拟的。但是，该方法在反应信号检测与数据处理等方面需要昂贵设备，比较起来，DD方法还是有其优越性，如果实验设计合理，技术应用得当，相信对分子生物学研究有帮助。
参考文献
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